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11步总结鸡elisa检测试剂盒的稀释与加样步骤
阅读次数:58  发布时间:2019/3/13 10:05:32

       鸡elisa检测试剂盒性能:
  
  1.灵敏度:zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
  
  2.特异性:不与其它细胞因子反应。
  
  3.重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
  
  鸡elisa检测试剂盒标本的采集及保存:
  
  1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
  
  2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
  
  3.细胞培养物上清或其它生物标本:1000xg离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
  
  注:标本溶血会影响zui后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
  
  鸡elisa检测试剂盒操作步骤:
  
  1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为120U/L,80U/L,40U/L,20U/L,10U/L)。
  
  2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  
  3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
  
  4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
  
  5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  
  6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  
  7.温育:操作同3。
  
  8.洗涤:操作同5。
  
  9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  
  10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  
  11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
        
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