大赢家彩票官网

设为首页  |   加入收藏  |   联系我们
产品目录
代理品牌
酶联免疫学类
分子学类
生化学类
ELISA试剂盒
进口ELISA试剂盒
人ELISA试剂盒
国产ELISA试剂盒
人ELISA试剂盒价格
小鼠ELISA试剂盒
大鼠ELISA试剂盒
豚鼠ELISA试剂盒
猪ELISA试剂盒
鸡ELISA试剂盒
兔ELISA试剂盒
Spectrum试剂
进口试剂
生化试剂
USP级试剂
Amresco试剂
氨基酸试剂
酶试剂
蛋白质试剂
抗生素试剂
植物激素及核酸试剂
其他生化试剂
缓冲剂试剂
表面活性剂
维生素试剂
色素试剂
碳水化合物试剂
澳洲血清
胎牛血清
美国进口血清
动物血清
人血清
ABCAM抗体
一抗
二抗
进口标准品
对照品
标准品
食品检测试剂盒
检测试剂盒
检测试纸条
PCR检测试剂盒
ELISA快速检测试剂盒
食品与农产品安全速测试剂盒
进口其他检测试剂盒
金标试剂盒
性病试剂盒
传染病试剂盒
优生优育试剂盒
自身免疫试剂盒
寄生虫试剂盒
微生物培养试剂盒
染色液试剂盒
免疫化学品
免疫球蛋白抗原
纯化抗体
荧光素标记抗体
酶标记抗体
酶标亲合素及生物素化抗体
免疫血清
其它方法测试盒
速率法测试盒
终点法测试盒
比色法测试盒
染色测试盒
其它测试盒
农药标准品
杀虫剂标准品
杀菌剂标准品
除草剂标准品
杀鼠剂标准品
Spectrum试剂新品上市
联系我们
  • 地址:上海市杨浦区控江路1029弄B幢105室
  • 电话:021-60531073,60520348
  • 传真:021-64881400
  • 手机:18221656311,13296034073,13296070348
  • 联系人:钱经理
  • 网址:njxjlmy.com
  • 邮箱:2885617636@qq.com
你当前的位置:技术文章

细胞冻存和复苏
阅读次数:17  发布时间:2019/10/16 8:51:28

     细胞冻存及复苏的基本原则是“慢冻快融”,这样可以zui大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多用二甲基亚砜(DMSO)作为保护剂,这两种物质能提高细胞膜对水的通透性;缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外,减少细胞内冰晶的形成,从而减少冰晶对细胞的物理损伤。复苏细胞采用快速融化的方法可以保证细胞外结晶在很短的时间内融化,避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

 
    细胞冻存操作要点:
 
    1.细胞冻存前12~24h,换新鲜培养基,使细胞一直处于对数生长期。
 
    2.待细胞长至80%汇合时胰酶消化,用新鲜培养基吹打后制成细胞悬液,1000rpm离心10min。悬浮细胞则直接离心。
 
    3.弃上清,加入冻存液重悬细胞沉淀,调整细胞浓度为3×106~1×107cells/mL。将细胞悬液分至冻存管内,每管1~1.5mL,拧紧盖子。在管壁上做好标记,标明细胞名称、冻存日期等。(细胞冻存液配方可为胎牛血清:培养基:DMSO=4:5:1或胎牛血清:培养基:DMSO=1:8:1或胎牛血清:DMSO=9:1,可根据各实验室实际条件调整)
 
    4.按下列顺序依次降温:室温→4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃过夜→液氮保存。也可使用程序降温盒更为方便,细胞冻存管放入程序降温盒内可直接放入-80℃过夜,再转至液氮罐内。注意程序降温盒内异丙醇的量必须高于zui低刻度线;冻存5次后异丙醇需要跟换一次,以免影响冻存效果。
 
    5.细胞冻存后应取出一管复苏,检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存,为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养,观察细胞生长情况,再继续冻存。
 
    细胞复苏操作要点:
 
    1.将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
 
    2.将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,避免引起污染。
 
    3.用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
 
    4.800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
 
    5.将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
 
    6.第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
 
    对DMSO不敏感的细胞在复苏时也可不离心,减少操作步骤,也可降低污染的几率。将解冻的细胞悬液直接转移至T25细胞瓶内,补加新鲜培养基,放入温箱内培养。但培养12~20h后必须换新鲜的培养基,移除死细胞。

上海恒远生物技术发展有限公司主营:ELISA试剂盒,ELISA试剂盒价格,国产ELISA试剂盒,进口ELISA试剂盒

公司名称:上海恒远生物技术发展有限公司 公司地址:上海市杨浦区控江路1029弄B幢105室 邮政编码:200093 邮箱:2885617636@qq.com
联系人:钱经理 联系电话:021-60531073,60520348 ICP备案号:沪ICP备11004148号-11 技术支持:阿仪网总访问量:4804566
阿仪网推荐收藏该企业网站

沪公网安备 9号彩票njxjlmy.com版权所有

友情链接:现金网  现金网  CNC娱乐  现金网  CNC娱乐  现金网官网  CNC娱乐  现金网  CNC娱乐  现金网  

免责声明: 本站资料及图片来源互联网文章,本网不承担任何由内容信息所引起的争议和法律责任。所有作品版权归原创作者所有,与本站立场无关,如用户分享不慎侵犯了您的权益,请联系我们告知,我们将做删除处理!